在ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌是否完全直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。以下是判斷洗滌效果的關(guān)鍵指標(biāo)和操作要點(diǎn)：

一、洗滌效果的判斷標(biāo)準(zhǔn)

1、?殘留量檢測?

使用洗板機(jī)時，孔內(nèi)殘留液體應(yīng)≤2μL/孔，這是評價洗滌效果的核心指標(biāo)。手工洗滌后，拍干時孔底不應(yīng)有明顯液體殘留，僅允許中心周圍有微量液體（≤5μL）。

2、?背景值控制?

空白孔（S0）的OD值應(yīng)<0.2（夾心法），若背景值偏高（如>0.1），可能提示洗滌不徹底或交叉污染。

3、?顯色梯度?

標(biāo)準(zhǔn)品孔應(yīng)呈現(xiàn)明顯的濃度梯度顯色，若整板顯色均勻或背景渾濁，需檢查洗滌步驟。

二、影響洗滌效果的關(guān)鍵因素

1、?洗滌液配制

推薦使用含0.05%~0.2%吐溫20的PBS/TBS緩沖液，濃度過高可能導(dǎo)致抗原解吸附。

洗滌液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免結(jié)晶或污染；若出現(xiàn)鹽結(jié)晶，需37℃溶解后稀釋。

2、?操作規(guī)范

?手工洗滌?：使用排槍加液，避免孔間交叉污染；拍干時用一次性吸水紙，力度適中防止板條脫落。

?洗板機(jī)參數(shù)?：設(shè)置洗滌量（通常300-350μL/孔）、洗滌次數(shù)（≥5次）及抽吸高度，確保殘留量達(dá)標(biāo)。

?浸潤時間?：每次洗滌后增加30秒浸潤時間，提升洗滌效果。

3、?溫度控制?

洗滌液溫度需保持在20~30℃，低溫易導(dǎo)致洗滌不徹底（“花板”現(xiàn)象）。

三、異常情況處理

1、?高背景值?：延長洗滌時間至5次以上，增加吐溫20濃度至0.1%，或更換封閉劑（如明膠）。

2、?交叉污染?：檢查洗板機(jī)針頭是否堵塞，手工洗滌時確保槍頭不刮擦孔底。

3、?顯色異常?：若標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差（R<0.99），需復(fù)測并驗(yàn)證洗滌步驟。

通過上述標(biāo)準(zhǔn)和方法，可有效評估洗滌效果，確保ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。?