ELISA實驗依賴于抗原-抗體的特異性結(jié)合和酶促顯色反應(yīng)，樣本保存不當(dāng)可能影響其中的生物分子活性，進(jìn)而干擾實驗結(jié)果。樣品保存不當(dāng)可能對ELISA結(jié)果產(chǎn)生以下影響：

一、溶血導(dǎo)致假陽性?

?機制?：溶血樣本釋放的血紅蛋白具有過氧化物酶活性，在以HRP為標(biāo)記的ELISA中會催化底物非特異性顯色。

?典型表現(xiàn)?：OD值異常升高，尤其在高靈敏度檢測中誤差可達(dá)30%以上。

二、微生物污染干擾?

細(xì)菌污染?：菌體內(nèi)源性HRP（如大腸桿菌）會直接催化顯色反應(yīng)，導(dǎo)致假陽性。

真菌污染?：可能分泌蛋白酶降解目標(biāo)抗原，造成假陰性。

三、樣品冷凍與解凍循環(huán)：

頻繁的冷凍與解凍循環(huán)會破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，降低其穩(wěn)定性，影響ELISA檢測的特異性和靈敏度。

四、樣品中脂質(zhì)含量過高：

高血脂樣本中的脂質(zhì)可能與抗原或抗體結(jié)合，干擾ELISA反應(yīng)，導(dǎo)致檢測值偏高或偏低。

五、保存溫度不當(dāng)（如未分裝冷凍）：

蛋白質(zhì)變性或降解，信號減弱或不穩(wěn)定。

六、容器吸附效應(yīng)：?

?塑料管吸附?：抗原物質(zhì)（如細(xì)胞因子）易吸附于塑料管壁，久置后濃度下降20%-50%。

?建議?：優(yōu)先使用硅化玻璃管或低吸附EP管保存樣本。

為了確保ELISA結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)嚴(yán)格按照實驗指南進(jìn)行樣品的采集、處理和保存，避免上述問題的發(fā)生。?